食品中微生物檢測方法有哪些 ?深圳食品類微生物檢測?健明迪

一、目的：

本規程旨在為微生物實驗室操作提供一個規范化規程；

二、適用范圍：

微生物實驗室；

三、責任人：

實驗室、微生物檢測員；

四、平安留意事項：

嚴厲遵照無菌操作，防止微生物污染;操作人員進入微生物實驗室應先關掉紫外燈。

五、微生物實驗室規范化操作規程：

1.微生物實驗室應設有無菌操作間緩和沖間，無菌操作間潔凈度應到達10000級，室內溫度堅持在20-24℃，濕度堅持在45-60%，超凈臺潔凈度應到達100級。

2.微生物實驗室應堅持清潔，嚴禁堆放雜物，以防污染。

3.嚴防一切滅菌器材和培育基污染，已污染者應中止運用。

4.微生物實驗室應備有任務濃度的消毒液(75％的酒精)。

5.微生物實驗室應活期用適宜的消毒液滅菌清潔，以保證微生物實驗室的潔凈度契合要求。

6.需求帶入微生物實驗室運用的儀器，器械，平皿等一切物品，均應包扎嚴密，并應經過適宜的方法滅菌。

7.任務人員進入微生物實驗室前，必需用肥皂或消毒液洗手消毒，然后在緩沖間改換公用任務服，鞋，帽子，口罩和手套(用75%的乙醇再次擦拭雙手)，方可進入微生物實驗室停止操作。

8.微生物實驗室運用前必需翻開微生物實驗室的紫外燈輻照滅菌30分鐘以上，并且同時翻開超凈臺停止吹風。操作終了，應及時清算微生物實驗室，再用紫外燈輻照滅菌30分鐘。

9.供試品在反省前，應堅持外包裝完整，不得開啟，以防污染。反省前，用75%的酒精棉球消毒外表面。

10.每次操作進程中，均應做空白對照，以反省無菌操作的牢靠性。

11.吸取菌液時，必需用吸耳球吸取，切勿直接用口接觸吸管。

12.接種針每次運用前后，必需經過火焰灼燒滅菌，待冷卻后，方可接種培育物。

13.帶有菌液的吸管，試管，培育皿于高壓蒸汽滅菌鍋121℃堅持20min后取出清洗。

14.如有菌液灑在桌上或地上，應立刻用75%酒精溶液覆在被污染處至少30分鐘，再做處置。任務衣帽等遭到菌液污染時，應立刻脫去，高壓蒸汽滅菌后洗濯。

15.凡帶有活菌的物品，必需經消毒后，才干在水龍頭下沖洗，嚴禁污染下水道。

16.微生物實驗室應每月反省菌落數。在超凈任務臺開啟的形狀下，取內徑90mm的無菌培育皿若干，無菌操作區分注入消融并冷卻至約45℃的營養瓊脂培育基約15mL，放至凝結后，倒置于30-35℃培育箱培育48小時，證明無菌后，取平板3-5個，區分放置任務位置的左中右等處，開蓋表露30分鐘后，倒置于30-35℃培育箱培育48小時，取出反省。100級潔凈區平板雜菌數平均不得超越1個菌落，10000級潔凈室平均不得超越3個菌落。如超越限制，應對微生物實驗室停止徹底消毒，直至重復反省契合要求為止。

如需了解2020年藥品 微生物、潔凈間、實驗室、計算機、數據完整性、注冊等

器械 無菌檢驗員、內審、滅菌、廠房驗證、管代、法規等課程和內訓均可聯絡。

食品類微生物檢測：

食品類微生物檢測詳細是指細菌學檢驗，包括細菌病毒總數、大腸桿菌和病原體的檢驗。經典的方法有固體細胞培育液法（用于細菌病毒總數的檢驗），液體細胞培育液發酵法（用于大腸桿菌的檢驗）效勞范圍：

各種食品類，植物性、植物性原輔資料、消費加工產品、半消費加工產品，如糧食、油脂、調味料、肉食品、飲料、罐頭、餅干、糖果類、酒水飲料、蔬菜、炒貨、食用添加劑、農產品、兒童食品、豆制品、點心等。

菌落總數：

食品衛生平安規范規則:食品類微生物學檢測菌落總數測定 GB 4789.2-2016.

大腸桿菌計數：

食品衛生平安規范規則:食品類微生物學檢測大腸桿菌計數 GB 4789.3-2016.

沙門氏菌：

食品衛生平安規范規則:食品類微生物學檢測沙門氏菌檢測 GB 4789.4-2016 （不測血細胞分型）。

志賀氏菌：

食品衛生平安規范規則:食品類微生物學檢測 志賀氏菌檢測 GB 4789.5-2012.

副溶血性弧菌：

食品衛生平安規范規則:食品類微生物學檢測副溶血性弧菌檢測 GB 4789.7-2013 （不測血細胞分型）。

金黃色葡萄球菌 :

食品衛生平安規范規則:食品類微生物學檢測金黃色葡萄球菌檢測 GB 4789.10-2016.

溶血性鏈球菌：

食品衛生平安規范規則:食品類微生物學檢測 β型溶血性鏈球菌檢測GB4789.11-2014.

蠟狀芽孢桿菌 :

食品衛生平安規范規則:食品類微生物學檢測 蠟樣芽孢桿菌檢測 GB 4789.14-2014.

霉菌和酵母計數 :

食品衛生平安規范規則:食品類微生物學檢測 霉菌和酵母計數 GB 4789.15-2016.

單核細胞增生李斯特氏菌 :

食品衛生平安規范規則:食品類微生物學檢測單核細胞增生李斯特氏菌檢測 GB 4789.30-2016.

乳酸菌 :

食品衛生平安規范規則: 食品類微生物學檢測乳酸菌檢測 GB 4789.35-2016.

大腸埃希氏菌計數 :

食品衛生平安規范規則:食品類微生物學檢測 大腸埃希氏菌計數 GB 4789.38-2012.

大腸埃希氏菌O157:H7/NM :

食品衛生平安規范規則:食品類微生物學檢測大腸埃希氏菌O157:H7/NM檢測 GB 4789.36-2016.

調料檢測 :

食品衛生平安微生物學檢測 調料檢測 GB/T 4789.22-2003.

糖果、點心、果脯加工檢測 :

食品衛生平安微生物學檢測 糖果、點心、蜜餞檢測 GB/T 4789.24-2003.

酒類檢測 :

食品衛生平安微生物學檢測 酒類檢測 GB/T 4789.25-2003.

商業效勞無菌 :

食品衛生平安規范規則:食品類微生物學檢測 商業效勞無菌檢測 GB 4789.26-2013 不做附則B異常狀況說明。

一、什么是才干驗證 實驗室才干驗證，深刻地講，就是評價一個實驗室有無展開某項檢驗檢測活動、出具合法有效的檢驗檢測報告的才干。才干驗證的目的是保證明驗室的運轉滿足質量管理的要求，出具的結果公允公正、合法有效。 才干驗證要從兩個方面來入手： *，硬件：能否具有與所要從事的檢驗檢測活動相婚配的場地、人員、設備。 第二，軟件：人員的才干能否滿足要求，實驗室的管理運轉能否滿足要求。

二、實驗室收到盲樣菌株標本后 1、操作前細心閱讀參指點書，尤其小的備注要留意，很多特殊狀況的處置大都在備注里。 2、樣品接納前的反省很重要，首先對樣品的完整性停止反省，對信息的閱讀要片面，假設發現樣品有效果及時溝通，這樣要比做樣品的時分在發現來的要及時，能節省不少的時間； 3、作業指點書的閱讀要到位，很多才干驗證樣品寄到后要跟一份作業指點書，作業指點書中往往會對本次才干驗證的樣品、成分、尺寸、選擇方法、樣品的結果記載、包括修約或樣品的粘貼、樣品寄發的留意事項等有明白的規則，熟讀這些對實驗預備有很好的作用。比如有的會要求將實驗后樣品一塊寄發組織單位，有的實驗室假設不細心閱讀的話很容易將測試后樣品立刻處置掉，假設寄樣時在看見可就完了。 4、測試前的預備任務一定要做好，包括設備的校準、試運轉等，有條件的狀況下可以在正式測試前選擇一塊相仿的樣品停止一下預測試，這樣會將測試進程中的效果提早發現提早處置。對正式測試的操作有協助。

三、才干驗證樣品處置 1、樣品測試進程中的判別才干很重要，有時分我們在測試中往往會自以為是，為了保證測試進程中的準確操作*好是找一個閱歷豐厚的作督察，發現效果及時處置，假設等操作終了再發現效果的話能夠會由于樣品的消耗而無法驗證結果； 2、定量項目，西林瓶內樣品不可聯系，應全部用于檢測。普通參考書指點的是加40mL稀釋液制成40mL樣品。 3、定量項目樣品稀釋。指點書標明了稀釋范圍的，在稀釋范圍左右各加1個稀釋度停止；書上沒有稀釋范圍的，多做稀釋倍數，選擇適宜的稀釋倍數計數（普通可稀釋至10-8）。 4、定量項目，除了要多做稀釋倍數外，同時同一稀釋度要多倒幾皿，從原理下去講，檢測進程屬于隨機抽樣反省，平板越多，數據越接近真值。思索性價比，又不能夠不時瘋狂一個稀釋度很多平板，所以才干驗證時分多倒幾皿，求好結果。 5、定性項目有一些重要步驟。 a、增菌及分別步驟尤其重要。選擇適宜的增菌液和分別用培育基對目的菌的檢出十分關鍵，選擇兩種以上的增菌液和分別用培育基對菌株作直接分別和增菌后分別。 b、劃線分別十分重要，要把增菌液中的目的菌盡量多的表達出來，要分出單個菌落并盡能夠多挑取可疑菌落，確保分別到目的菌。 c、生化實驗和血清學實驗以營養瓊脂平板上的純培育細菌為好。

四、實驗進程一定要做陰陽對照 陽性對照，是在試知驗中，檢驗培育基和培育條件能否適宜，假設在實驗中，陽性實驗沒有生長的話，那這個實驗是失敗的。陰性對照主道要是檢測培育基能否污染，在沒有參與任何東西培育時，培育基培育后還是會顯示陽性回結果，這就說明培育基滅菌不徹底，染菌答了，這樣也會影響實驗結果的。

五、培育基方面需求留意的中央 1、培育基配制充沛混勻后再滅菌。 正確做法是用一局部水攪拌平均后，再參與剩余水量，混勻后滅菌或分裝。 2、混菌法倒皿要充沛混勻。 培育基倒完要左5圈右5圈（混勻速度一定要慢，目的是——防止培育基動搖到二皿接觸的縫隙局部形成后續污染），找較水平位置冷卻凝結。 3、培育基要不要掩蓋效果。 掩蓋的目的是為了阻止活菌在培育基表層經過鞭毛移動，形成片狀生長，無法計數這一不利現象的發作。這里可以發揚客觀能動性-關于不運動的菌，可以不掩蓋，關于運動的菌掩蓋。 總結一下： a臨時檢測同一種樣品，不掩蓋并無蔓延現象，不掩蓋；臨時檢測蔓延選擇了掩蓋，不時掩蓋。 b未知樣品，停止掩蓋和不掩蓋的比對實驗，然后決議以后異樣的樣品能否需求掩蓋。養成閱歷。 c才干驗證明驗，掩蓋和不掩蓋的都做，不要吝惜那么一點點培育基或耗材，畢竟才干驗證明驗做的美麗才是實驗室（是室而不是人！）才干的綜合表現。 4、培育進程防止平皿枯燥。 培育進程中培育基可以倒的適當厚一些，比如25mL。培育箱底部接一個不銹鋼盆，裝上足量無菌水。 5、 實驗培育進程勤觀察。 微生物培育進程普通需求幾小時到幾十小時，要應用這段時間觀察培育箱及菌生長狀況，比如溫度能否動搖，培育室內濕度如何等等，多思多看，預備預案。方有能夠失掉與盲樣分歧的實驗結果。 原始記載應有條理、思緒明晰,完整準確地記載菌株鑒定檢驗的全進程,原始記載要包括時間、實驗現象、實驗結果三個要素，方便實驗出現效果的查找。 結武判定 結果的判定普通依據設備操作，但是關于人為操作如評級、手工操作等結果能夠會由于人員的差異而會有不同的偏向，這樣在判定時*好是找有閱歷的部門擔任人或質量專家一塊定奪，這樣的話會增加很多不用要的錯誤。