皮膚細胞培育技術可模擬人體內的生理環(huán)境，研討細胞與細胞之間的反響，細胞與間質之間的反響等，具有快速、經(jīng)濟的特點，既可用來毒性剖析，也可停止成效評價，是保證化裝品平安、有效的必要手腕，為皮膚生理學等提供了技術基礎。

一、人永生化角質細胞（Human immortalized keratinocytes，HaCaT 細胞）

角質構成細胞（KC）的體外培育技術曾經(jīng)十分成熟，其生長較快、細胞存活率較高，但也易老化且傳代次數(shù)較少，所以在化裝品成效評價中通常會運用HaCaT細胞（即非腫瘤來源的永生化人正常皮膚的KC株，與KC分化特性相似，具有易于培育、傳代次數(shù)多的優(yōu)點）。

1、HaCaT細胞運用于保濕成效評價

HaCaT細胞可分解透明質酸（Hyaluronic acid，HA）、水通道蛋白（Aquaporin，AQP）、嚴密銜接蛋白（Tightjunction protein，TJP）以及絲聚蛋白（Filaggrin，F(xiàn)LG）等與皮膚保濕相關的生物分子。因此，可以經(jīng)過檢測化裝品原料對HaCaT細胞中AQP、claudin-1（claudin-1是TJP中構成表皮細胞旁屏障的主要跨膜蛋白）和FLG等保濕相關蛋白含量的影響來反映其保濕才干，對保濕化裝品停止成效評價。

不過如今停止保濕成效測試普通會經(jīng)過人體實驗的方法，這樣更直觀一些，HaCaT細胞測試可用于研討原料的保濕機理。

2、HaCaT細胞運用于抗氧化成效評價

活性氧（ROS）過量會對DNA和蛋白質發(fā)生氧化損傷；丙二醛（MDA）是生物體內自在基作用于脂質發(fā)作過氧化反響的終產(chǎn)物。因此，經(jīng)過檢測其中HaCaT細胞內ROS和MDA的含質變化可反映出細胞內氧化應激的水平， 評價化裝品原料的抗氧化才干。

超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化氫酶（CAT）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSHPX）可用于用于肅清或降低氧自在基形成的損傷。因此，經(jīng)過檢測SOD、CAT和GSHPX的生機，可反映化裝品原料對HaCaT細胞內自在基的肅清才干的影響，以此來評價化裝品原料的抗氧化才干。

例如，王茵等人經(jīng)過測量小鼠肝臟組織的抗氧化酶系統(tǒng)活性（SOD，GSHPX，AOC（總抗氧化才干），MDA，NO（一氧化氮））來研討蝦青素的抗氧化效果。*終結果顯示蝦青素可提高小鼠肝臟和血液中的SOD，GSHPX，AOC等活性目的，降低MDA和NO的濃度，即蝦青素具有抗氧化才干。

二、小鼠B-16黑色素瘤細胞（簡稱B-16細胞）

黑素細胞（Melanocyte，MC）是皮膚內的一種特殊細胞，它位于表皮的基底層，細胞內的黑素小體（Melanosomes）能分解黑色素（Melanin），并轉移到周圍的角質構成細胞中，為皮膚提供顏色。但是黑素細胞的增殖比擬緩慢，所以常用B-16細胞替代黑素細胞停止細胞實驗。（B-16細胞在基本結構與黑色素分解功用方面與人黑素細胞基本相反，且增殖才干更強，可以屢次傳代，適宜用于實驗研討）。

B-16細胞可運用于美白成效評價，例如馬佳等研討了壬二酸對人表皮黑素細胞和鼠黑素瘤B16細胞黑素分解的影響。與空白對照組比擬? 0.1 mmol//L壬二酸即顯示抑制人表皮黑素細胞的酪氨酸酶活性和黑素的分解，同等濃度的壬二酸對鼠黑素瘤B16細胞的酪氨酸酶活性和黑素分解也有抑制造用。

三、人皮膚成纖維細胞（Human skin fibroblast，HSF）

HSF是皮膚真皮層中*主要的細胞，關于維持皮膚的彈性和張力具有重要的作用。HSF具有很強的蛋白質分解才干，可以分解并分泌少量彈性蛋白、膠原蛋白、糖胺多糖和糖蛋白等基質成分，進而生成彈性纖維、膠原纖維和網(wǎng)狀纖維，分泌多種細胞修復因子，使得皮膚具有弱小的更新與自我修復才干。

人皮膚成纖維細胞可運用于抗衰老成效評價，例如鄭雯等研討了白藜蘆醇對UVB照射的人皮膚成纖維細胞基質金屬蛋白酶（MMP-1）水平及細胞凋亡的影響，即白藜蘆醇對紫外線照射皮膚的光維護作用。結果標明白藜蘆醇能經(jīng)過抑制UVB照射所形成的人皮膚成纖維細胞MMP-1水平增長，使皮膚真皮組織膠原蛋白的分解增加，從而延緩紫外線照射對皮膚形成的損傷和老化進程。

四、人角質構成細胞（HKC）

人角質構成細胞系一種能分解角質蛋白的上皮細胞。此類細胞為表皮的主體，由表皮深層始逐漸增殖、分化，并不時向表層移行，其間可分紅幾個層次，表皮*深層為基底層，向上依次為棘層、顆粒層、角質層，角質蛋白亦依生長層次逐漸分解。

人角質構成細胞是表皮中*重要的細胞之一，它可以反映表皮的安康形狀，所以也有少量的研討人員將它運用于化裝品原料的研討與運用，例如王剛等經(jīng)過實驗證明阿魏酸是經(jīng)過影響HKC下游炎癥因子如TNF-α和IL-8分泌，從而參與調理免疫反響的信號傳導機制，到達對HKC的維護作用。

END

參考資料：

[1] 郭立群. 化裝品成效評價(Ⅶ)-細胞生物學在化裝品成效評價中的運用. 日用化學工業(yè). 2018.

[2] 馬宇晨. 用于化裝品成效評價的皮膚細胞類型、特點及運用概略. 日用化學工業(yè). 2021.

[3] 關英杰. 皮膚細胞培育技術在化裝品成效研討中的運用. 日用化學工業(yè). 2002.

[4] 王茵. 自然蝦青素的抗疲勞及抗氧化作用研討. 西南大學學報（自然迷信版）. 2015.

[5] 馬佳. 壬二酸對人黑素細胞和鼠黑素瘤B16細胞黑素分解功用的影響. 安徽醫(yī)科大學學報. 2006.

[6] 鄭雯. 白藜蘆醇對UVB照射的人皮膚成纖維細胞MMP-1水平及細胞凋亡的影響. 中國皮膚性病學雜志. 2012.

[7] 王剛. 阿魏酸對人角質構成細胞的維護作用. 醫(yī)藥導報. 2011.

《化裝品成效宣稱評價指點準繩》

起草說明

為規(guī)范和指點我國化裝品成效宣稱的評價任務，配合《化裝品監(jiān)視管理條例》的實施，國度藥品監(jiān)視管理局組織起草了《化裝品成效宣稱評價指點準繩》（征求意見稿）（以下簡稱“指點準繩”）。現(xiàn)就起草任務的有關狀況說明如下：

一、必要性

依據(jù)《化裝品監(jiān)視管理條例》第二十二條的要求，化裝品的成效宣稱應當有充沛的迷信依據(jù)，且化裝品注冊人、備案人應當在國務院藥品監(jiān)視管理部門規(guī)則的專門網(wǎng)站發(fā)布成效宣稱依據(jù)的相關資料，接受社會監(jiān)視。目前，除防曬及防曬產(chǎn)品的防水成效需求依據(jù)《化裝品平安技術規(guī)范》的要求停止成效評價外，并未對其他化裝品成效宣稱提出要求。

為保證消費者的合法權益，規(guī)范行業(yè)行為和促停止業(yè)安康開展，經(jīng)過對現(xiàn)有化裝品成效宣稱評價體系、國際外評價方法及評價部門/機構的調研剖析，結合我國化裝品法規(guī)要求及行業(yè)實踐狀況，起草本指點準繩，為化裝品成效宣稱評價任務提供指點依據(jù)。

二、主要內容

（一）堅持迷信性和可行性。普遍參考歐、美、日、韓相關法規(guī)、行業(yè)/學術組織發(fā)布的成效宣稱評價方法和文獻資料的基礎上，充沛結合我國行業(yè)現(xiàn)狀，對化裝品成效宣稱評價的內容、范圍、責任主體、總體準繩、方法選擇和機構選擇等提出基本要求。

（二）堅持行業(yè)自律及規(guī)范性。規(guī)則化裝品注冊人、備案人應當實行其主體責任，在國度藥品監(jiān)視管理局規(guī)則的網(wǎng)站向社會地下化裝品成效宣稱依據(jù)的摘要，經(jīng)過社會監(jiān)視的方式，而不是行政審批來處置成效宣稱的真實性效果。

三、需求重點說明的效果

（一）關于成效宣稱評價范圍。依據(jù)國際外對成效化裝品的分類和我國《化裝品分類規(guī)則和分類目錄》（征求意見稿）中的成效宣稱分類用語，對比研討后發(fā)現(xiàn)“防脫發(fā)、防曬、祛痘”等化裝品的運用風險較高，上述幾類產(chǎn)品有的在美國作為“OTC藥品”；或在日本作為“醫(yī)藥部外品”；或在韓國作為“醫(yī)藥外品”嚴厲管理。《指點準繩》規(guī)則了化裝品成效宣稱評價準繩，消費者可經(jīng)過感官識別的，或產(chǎn)品經(jīng)過物理作用發(fā)失效果且在標簽中明示的，可豁免提交成效宣稱評價資料。

（二）關于成效宣稱評價機構。化裝品成效宣稱評價的責任主體為化裝品的注冊人、備案人，可自行或委托具有相應才干的評價機構承當成效宣稱的評價任務。防曬、祛斑美白、防脫發(fā)和新成效應委托化裝品注冊備案檢驗機構評價和方法驗證。

（三）關于成效宣稱評價方法。評價方法可選用國際外相關法規(guī)、規(guī)范、規(guī)范規(guī)則的方法，威望組織或技術機構及行業(yè)協(xié)會指南、專業(yè)學術雜志地下宣布方法等，也可運用閱歷證的實驗室自擬方法。同一成效宣稱有多種可選擇的評價方法時，應優(yōu)先選擇我國現(xiàn)行法律法規(guī)、國度規(guī)范或技術規(guī)范中的方法。防曬、祛斑美白、防脫發(fā)成效宣稱評價選擇《化裝品平安技術規(guī)范》以外的方法時，需停止方法驗證。

（四）關于祛斑美白成效評價交叉參照。思索到我國的行業(yè)現(xiàn)狀，在調研了祛斑美白成效作用機制、影響成效發(fā)揚的主要要素及祛斑美白成效評價方法的基礎上，參考防曬化裝品管理閱歷，對祛斑美白成效評價交叉參照提出準繩性要求。

（信息來源：化裝品檢定所；編發(fā)：北京天健華成國際投資顧問有限公司化裝品注冊部 http://www.zhuceabc.cn）